ABSTRACT
A citocina imunoregulatória interleucina-10 (IL-10) exerce função proliferativa em células B. Variações no promotor do gene da IL-10 regulam a expressão da proteína e a infecção com o vírus Epstein-Barr (EBV). Este trabalho objetivou investigar a associação dos polimorfismos da IL-10 com a susceptibilidade e resposta clínica no linfoma de Burkitt pediátrico (LB), de acordo com o status do EBV. Foi realizado um estudo caso-controle, incluindo 62 crianças com LB (2-16a) e 230 doadores saudáveis como grupo controle. O EBV foi detectado por EBER-ISH. Os SNPs -1082A/G e - 592A/C foram genotipados por PCR alelo específica (AS-PCR) e os haplótipos proximais por três AS-PCR cruzadas por caso. Iniciadores fluorescentes discriminaram alelos dos microssatélites IL10.G e IL10.R. A estatística incluiu testes não paramétricos para comparações caso-controle; regressão logística para cálculo de odds ratios (OR) com intervalos de confiança de 95% (IC 95%); e o método de Kaplan-Meier e comparações Log-rank para análise de sobrevida. As freqüências dos genótipos AA, AG e GG, do SNP -1082A/G, foram de 34,4%; 41%; 24,6% para pacientes e 46,5%; 43,9%; 9,6% para controles (Teste de Fisher, p=0,0017) com aumento do risco de desenvolvimento de LB na presença do genótipo GG (modelo recessivo) (OR 3,08; IC95% 1,49-6,4). As freqüências de CC, CA e AA, no SNP -592C/T, foram de 56,7%; 36,7%; 6,7% para pacientes e 42,9%; 44,7%; 12,4% para controles (Teste de Cochran- Armitage, p=0,045; OR=1,59; IC95% 1,01-2,51). A freqüência da combinação GCC/GCC mostrou diferenças nos pacientes vs. controles (25,4% vs. 10,1%; OR 3,02, IC95% 1,45-6,29, p=0,004). Não houve diferenças quanto às freqüências genotípicas dos polimorfismos de IL-10 entre os grupos EBV+ (n=33, 54,1%) e EBV- (n=28,45,9%). Foi observada uma estratificação etária no grupo de pacientes, com predominância do EBV no grupo 10 anos (HR 25,9; IC95% 3,13214,5; p=0,03). Análise de sobrevida de 39 pacientes tratados uniformemente revelou que a presença do EBV foi associada a um desfecho favorável na sobrevida global (SG) (95,7% vs. 66,7%, p= 0,017), e livre de doença (SLD) (91,3% vs. 60%, p=0,021). Já a presença da família IL10.01 (R3-GCC) foi associada a pior SG (50% vs. 91,7%, p=0,005) e SLD (50% vs.83,3%, p=0,042). Tanto EBV quanto IL10.01 refletiram a SLD dos pacientes no grupo de risco avançado (GR3) (92,9% vs. 69,6%, p=0,097). A presença do alelo G12 também modificou a SLD dos pacientes no GR3 (33,3% vs. 81,3%, p=0,034). Um modelo de resposta terapêutica proposto a partir das variáveis independentes (EBV e IL10.01) para a SLD mostrou que pacientes EBV+/IL10.01- apresentaram 92,9% de SLD, comparados aos pacientes EBV-/IL10.01+, 25% (p=0,017). Em conclusão, variantes genéticas de IL-10 foram associadas ao risco desenvolvimento do LB com efeito de dose do haplótipo GCC...
The immunoregulatory cytokine Interleukin-10 (IL-10) exerts B cell proliferation functions. Genetic variations in the IL-10 gene promoter regulate the protein expression and Epstein-Barr virus (EBV) infection. We aimed to investigate whether IL-10 polymorphisms are associated to susceptibility and clinical outcome in pediatric Burkitt lymphoma (BL), according to EBV status. A case-control study including 62 children (2-16 y) with BL and a control group of 230 healthy donors was performed. EBV was detected by EBER-ISH. SNPs 1082A/G and 592C/T were genotyped by allelespecific (AS)-PCRs and the proximal haplotypes by three crossing PCRs by case. Fluorescent primers discriminated alleles of microsatellite IL10.G and IL10.R. The statistic included non-parametric tests for case-control analyses; logistic regression for the odds ratio (OR) with 95% confidence intervals (95% CI); and the Kaplan-Meier method and Log-Rank comparisons for survival analysis. Genotypes frequencies of AA, AG e GG of SNP -1082A/G were 34.4%; 41%; 24.6% for patients and 46.5%; 43.9%; 9.6% for controls (Fisher Test, p=0.0017) with a higher risk of BL development in the presence of GG genotype (recessive model) (OR 3.08; IC95% 1.49-6.4). The frequencies of CC, CA and AA genotypes of SNP -592C/T were 56.7%; 36.7%; 6.7% for patients and 42.9%; 44.7%; 12.4% for controls (Cochran-Armitage Test, p=0.045; OR=1.59; IC95% 1.01-2.51). The frequency of the haplotype combination GCC/GCC showed differences in patients vs. controls (25.4% vs. 10.1%; OR 3.02, IC95% 1.45- 6.29, p=0.004). Differences were not detected by comparing the genotype frequencies between EBV+ (n=33, 54.1%) and EBV- (n=28, 45.9%) groups. Age stratification was observed in the group of patients, in which EBV predominated in the age group 10y. (HR 25.9; IC95% 3.13214.5; p=0.03). Survival analysis of 39 patients uniformly treated showed that presence of EBV was associated to a better overall survival (OS) (95.7% vs. 66.7%, p= 0.017), and disease free survival (DFS) (91.3% vs. 60%, p=0.021). Yet, the presence of IL10.01 family (R3-GCC) was associated to poor OS (50% vs. 91.7%, p=0.005) and DFS (50% vs. 83.3%, p=0.042). EBV and IL10.01 both reflected DFS of patients in the higher risk group (GR3) (92.9% vs. 69.6%, p=0.097). The presence of G12 allele also modified patients DFS at GR3 (33.3% vs. 81.3%, p=0.034). A therapeutic response model based on independent variables at DFS (EBV and IL10.01) showed that patients EBV+/IL10.01- presented 92.9% DFS, compared to patients EBV-/IL10.01+, 25% (p=0.017). In conclusion, IL-10 genetic variants were associated to higher BL risk development with a dose effect of GCC haplotype...